สินค้า

ในการหาปริมาณสารเมแทบอไลต์หลายชนิดของ 5-ฟลูออโรยูราซิล (5-FU) และโมโนฟอสเฟตนิวคลีโอไทด์ภายในร่างกาย 2 ชนิดอย่างเจาะจง เราได้พัฒนาวิธีการดั้งเดิมโดยใช้โครมาโทกราฟีแบบของเหลว–แมสสเปกโตรเมตรี (LC-MS/MS)การสอบวิเคราะห์นี้อนุญาตให้กำหนดหา: (i) การผลิตภายในเซลล์ของ 5-ฟลูออโร-2′-ดีออกซียูริดีน-5′-โมโนฟอสเฟต (5-FdUMP) จาก 5-FU หรือ 5-ฟลูออโร-2′-ดีออกซียูริดีน (5-FdUrd) , (ii) ผลกระทบของความเข้มข้น 5-FdUMP ต่ออัตราส่วนภายในเซลล์ 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) และ (iii) ขอบเขตการหลั่งของ 5-FdUMP 5-FU จากเซลล์เพาะเลี้ยงของมนุษย์โดย ABC Transportersภายใต้เงื่อนไขการทดลองของเรา เซลล์ถูกบ่มด้วย 5-FU หรือ 5-FUrdจากนั้นโปรตีนในเซลล์จะถูกตกตะกอนด้วยเมทานอลขั้นตอนนี้ให้การกู้คืนการสกัดสูงนอกจากนี้ ในการวัดการหลั่ง 5-FU และ 5-FdUMP จากเซลล์ เราได้ดำเนินการหาปริมาณของโมเลกุลเหล่านี้ในอาหารเลี้ยงเชื้อสื่อถูกฉีดโดยตรง (5-FU) หรืออยู่ภายใต้การสกัดด้วยเฟสของแข็งโดยใช้ตลับสกัด Oasis Wax (5-FdUMP)การแยกสารวิเคราะห์ดำเนินการบนคอลัมน์ dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 มม. x 2.1 มม. id) ด้วยโหมดไอโซเครติกโดยใช้แอมโมเนียมฟอร์เมตบัฟเฟอร์/เมทานอล/น้ำ (5/5/90, v/v) เป็นเฟสเคลื่อนที่เวลาดำเนินการไม่เกิน 6.2 นาทีสารที่วิเคราะห์ถูกทำให้แตกตัวเป็นไอออนในส่วนติดต่อของสเปรย์ไฟฟ้าภายใต้โหมดไอออนลบเราตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการในช่วง 2.5–150 ng mL −1 ตามสารประกอบความแปรปรวนภายในและระหว่างการทดสอบต่ำกว่า 10% ในช่วงเจ็ดวันสารประกอบทั้งหมดมีความเสถียรในเซลล์หรือในอาหารเลี้ยงเชื้อเมื่อตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ −20 °C เป็นเวลาอย่างน้อยสองสัปดาห์ และหลังจากรอบการแช่แข็ง-ละลายสามครั้งไม่พบผลเมทริกซ์ในสื่อทั้งสอง