สินค้า

โปรตีนฟอสโฟรีเลชั่นควบคุมการทำงานของเซลล์ที่หลากหลายและมีบทบาทสำคัญในการพัฒนาต้นของพืชเพื่อเสริมและขยายการตรวจสอบก่อนหน้านี้ของโปรตีนฟอสโฟรีเลชั่นในต้นอ่อนอาราบิดอปซิส เราใช้วิธีทางเลือกที่ผสมผสานการสกัดโปรตีนภายใต้สภาวะที่ไม่ทำลายธรรมชาติด้วยการเสริมสมรรถนะด้วยโครมาโตกราฟีความสัมพันธ์ของไอออนโลหะตรึง (IMAC) ของฟอสโฟโปรตีนที่ไม่บุบสลายในสารสกัดที่พร่องรูบิสโก ตามด้วยการจำแนก โดยใช้เจลอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบสองมิติ (2-DE) และแมสสเปกโตรเมตรีโครมาโตกราฟีแบบของเหลว-ตีคู่ (LC-MS/MS)การย่อยทริปซินในเจลและการวิเคราะห์จุดเจลที่เลือกระบุ 144 phosphorylated peptides และสารตกค้าง ซึ่งมีเพียง 18 phosphopeptides และ 8 phosphosites เท่านั้นที่พบในฐานข้อมูลของไซต์ PhosPhAt 4.0 และ P3DB Arabidopsis thaliana phosphorylationมากกว่าครึ่งหนึ่งของฟอสโฟโปรตีน 82 ชนิดที่ระบุได้มีส่วนเกี่ยวข้องกับเมแทบอลิซึมของคาร์โบไฮเดรต การสังเคราะห์แสง/การหายใจ หรือกลไกการตอบสนองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันการเสริมปริมาณฟอสโฟโปรตีนที่ไม่บุบสลายก่อน 2-DE และ LC-MS/MS ดูเหมือนจะปรับปรุงการตรวจจับของทรีโอนีนและไทโรซีนที่ตกค้างด้วยฟอสโฟรีเลตเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีการที่ใช้การเพิ่มระดับเปปไทด์ ซึ่งบ่งชี้ว่าทั้งสองวิธีค่อนข้างเสริมกันในแง่ของการครอบคลุมไซต์ของฟอสโฟรีเลชั่นผลการเปรียบเทียบต้นกล้าอ่อนกับต้นอ่อนที่ได้รับจากใบอาราบิดอพซิสที่โตเต็มที่ ระบุโปรตีน 5 ชนิดที่มีฟอสโฟรีเลตต่างกันในเนื้อเยื่อเหล่านี้ ซึ่งแสดงให้เห็นถึงศักยภาพของเทคนิคนี้ในการตรวจสอบไดนามิกของโปรตีนฟอสโฟรีเลชั่นในระหว่างการพัฒนาพืช