สินค้า

การวิเคราะห์เหตุการณ์ฟอสโฟรีเลชั่นทั่วโปรตีโอมยังคงเป็นความท้าทายในการวิเคราะห์ที่สำคัญ เนื่องจากเครือข่ายฟอสโฟรีเลชั่นโปรตีนมีความซับซ้อนอย่างมากในงานนี้ เราประเมินความสมบูรณ์ของ Lys-N, Lys-C และ trypsin โดยคำนึงถึงความสามารถในการมีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ทั่วโลกของฟอสโฟโปรตีนรุ่นปรับปรุงของการแลกเปลี่ยนไอออนบวกที่มีค่า pH ต่ำถูกนำมาใช้เพื่อแยกเปปไทด์ที่ปลาย N อะซิติเลต ฟอสโฟรีเลต และเปปไทด์ที่ไม่ดัดแปลงอย่างมีประสิทธิภาพฟอสโฟเปปไทด์ที่ไม่ซ้ำซ้อนทั้งหมด 5036 รายการสามารถระบุได้ด้วยอัตราการค้นพบที่ผิดพลาด <1% จากโปรตีน 1 มก. โดยใช้การรวมกันของเอนไซม์ทั้งสามข้อมูลของเราเปิดเผยว่าการทับซ้อนกันระหว่างชุดข้อมูลฟอสโฟเปปไทด์ที่สร้างด้วยโปรตีเอสต่างกันนั้นน้อยมาก ในขณะที่การทับซ้อนกันระหว่างชุดข้อมูลทริปติกที่สร้างขึ้นในทำนองเดียวกันสองชุดพบว่าสูงกว่าอย่างน้อย 4 เท่าด้วยวิธีนี้ การใช้ Lys-N และทริปซินแบบคู่ขนานทำให้สามารถเพิ่มจำนวนฟอสโฟเปปไทด์ที่ตรวจพบได้ 72% เมื่อเปรียบเทียบ d กับทริปซินเพียงอย่างเดียว ในขณะที่การทดลองซ้ำแบบทริปซินนำไปสู่การเพิ่มขึ้นเพียง 25%ดังนั้น เมื่อมุ่งเน้นไปที่ข้อมูลทริปซินและ Lys-N อย่างเดียว เราจึงระบุฟอสโฟเปปไทด์ที่ไม่ซ้ำซ้อนได้ 4671 รายการการวิเคราะห์เพิ่มเติมของไซต์ที่ตรวจพบแสดงให้เห็นว่าชุดข้อมูล Lys-N และทริปซินได้รับการเสริมคุณค่าด้วยแรงจูงใจของฟอสโฟรีเลชั่นที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งแสดงให้เห็นเพิ่มเติมว่าแนวทางมัลติโปรตีเอสมีค่ามากในการวิเคราะห์ฟอสโฟโปรตีน