สินค้า

ลักษณะที่ผลของการกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นพร้อมๆ กันรวมกันเพื่อเปลี่ยนกิจกรรมของเอนไซม์นั้นไม่สามารถคาดเดาได้ง่าย เพราะผลกระทบเหล่านี้ไม่ได้เป็นการเพิ่มเติมในลักษณะเชิงเส้นเสมอไปดังนั้น ลักษณะของผลของการกลายพันธุ์พร้อมกันของกรดอะมิโนที่จับกับซับสเตรตสามารถมีส่วนสำคัญในการทำความเข้าใจความจำเพาะของซับสเตรตของเอนไซม์ในเบต้า-ไกลโคซิเดสจาก Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) ทั้งสารตกค้าง Q39 และ E451 จะทำปฏิกิริยากับซับสเตรต และนี่เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการกำหนดความจำเพาะของซับสเตรตการกลายพันธุ์แบบคู่ของ Sfbetagly (A451E39, S451E39 และ S451N39) ถูกเตรียมโดยการกลายพันธุ์ที่มุ่งที่ไซต์ซึ่งแสดงออกในแบคทีเรียและทำให้บริสุทธิ์โดยใช้โครมาโตกราฟีแบบสัมพรรคภาพเอนไซม์เหล่านี้แสดงคุณลักษณะโดยใช้ p-nitrophenyl beta-galactoside และ p-nitrophenyl beta-fucoside เป็นสารตั้งต้นอัตราส่วน k cat/Km สำหรับการกลายพันธุ์เดี่ยวและสองครั้งของ Sfbetagly ที่มีการกลายพันธุ์ที่ควบคุมโดยไซต์ที่ตำแหน่ง Q39 และ E451 ถูกใช้เพื่อแสดงให้เห็นว่าผลกระทบต่อพลังงานอิสระของ ESdouble dagger (เอ็นไซม์-ทรานซิชันสเตทคอมเพล็กซ์) ของการกลายพันธุ์สองครั้ง (Gdouble daggerxy) ไม่ใช่ผลรวมของผลที่เกิดจากการกลายพันธุ์ครั้งเดียว (Gdouble daggerx และ Gdouble daggery)ความแตกต่างนี้ใน Gdouble dagger บ่งชี้ว่าผลกระทบของการกลายพันธุ์เดี่ยวบางส่วนทับซ้อนกันดังนั้น เอฟเฟกต์ทั่วไปนี้จึงนับเพียงครั้งเดียวใน Gdouble daggerxyข้อมูลทางผลึกศาสตร์เกี่ยวกับเบตา-ไกลโคซิเดสเผยให้เห็นการมีอยู่ของพันธะไฮโดรเจนแบบไบเดนเทตที่เกี่ยวข้องกับสารตกค้าง Q39 และ E451 และกลุ่มไฮดรอกซิลเดียวกันของสารตั้งต้นดังนั้น ทั้งข้อมูลทางอุณหพลศาสตร์และผลึกศาสตร์บ่งชี้ว่าสารตกค้าง Q39 และ E451 มีอิทธิพลร่วมกันต่อปฏิกิริยาตามลำดับกับสารตั้งต้น