สินค้า

การทดสอบด้วยโครมาโตกราฟีแบบของเหลวประสิทธิภาพสูงแบบใหม่สำหรับไกลโคซิลทรานสเฟอเรสขึ้นอยู่กับการอนุพันธ์ด้วยกรดแอนทรานิลิกและการตรวจจับสารเรืองแสง

การทดสอบได้รับการพัฒนาโดยใช้เคมีการติดฉลากเฉพาะของกรด 2-อะมิโนเบนโซอิก (2AA; กรดแอนทรานิลิก, AA) สำหรับการวัดกิจกรรมของทั้ง β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) และ α2-6 sialyltransferase (ST-6) โดยของเหลวประสิทธิภาพสูง โครมาโตกราฟี (HPLC) พร้อมการตรวจจับฟลูออเรสเซนซ์ (Anumula KR. 2006. ความก้าวหน้าในวิธีการอนุพันธ์ของฟลูออเรสเซนซ์สำหรับการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงของคาร์โบไฮเดรตไกลโคโปรตีน Anal Biochem. 350:1-23)N-Acetylglucosamine (GlcNAc) และ N-acetyllactosamine ถูกใช้เป็นตัวรับและ uridine diphosphate (UDP)-galactose และ cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) เป็นผู้บริจาคสำหรับ GalT-1 และ ST-6 ตามลำดับผลิตภัณฑ์เอนไซม์ถูกติดฉลากในแหล่งกำเนิดด้วย AA และถูกแยกออกจากสารตั้งต้นบนคอลัมน์ TSKgel Amide 80 โดยใช้สภาวะปกติหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดจากพื้นที่สูงสุดโดยเปรียบเทียบกับมาตรฐานที่ได้รับอนุพันธ์ร่วมกัน Gal-β1-4GlcNAc และ NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAcมีการสร้างความเป็นเส้นตรง (เวลาและความเข้มข้นของเอนไซม์) ความแม่นยำ (ภายในและระหว่างการวิเคราะห์) และความสามารถในการทำซ้ำสำหรับการทดสอบการทดสอบพบว่ามีประโยชน์ในการตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ในระหว่างการแยกและการทำให้บริสุทธิ์การทดสอบมีความไวสูงและดำเนินการได้เท่ากับหรือดีกว่าการวัดน้ำตาลตามกัมมันตภาพรังสีแบบดั้งเดิมรูปแบบการทดสอบยังสามารถใช้สำหรับการวัดกิจกรรมของทรานสเฟอร์เรสอื่นๆ โดยมีเงื่อนไขว่าตัวรับคาร์โบไฮเดรตมีจุดสิ้นสุดสำหรับการติดฉลากการทดสอบสำหรับตัวรับไกลโคโปรตีนได้รับการพัฒนาโดยใช้ IgGวิธีการทำโปรไฟล์ HPLC แบบสั้นได้รับการพัฒนาสำหรับการแยก IgG glycans (biantennary G0, G1, G2, mono- และ disialylated) ซึ่งอำนวยความสะดวกในการกำหนดกิจกรรมของ GalT-1 และ ST-6 ในลักษณะที่รวดเร็วนอกจากนี้ วิธีการทำโปรไฟล์นี้ควรพิสูจน์ว่ามีประโยชน์สำหรับการติดตามการเปลี่ยนแปลงของ IgG glycans ในสถานพยาบาล